Información sobre la práctica:
El hierro (Fe) se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil. El hierro libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido ascórbico. Los iones ferrosos en presencia de FerroZine forman un complejo coloreado.
Por último, la intensidad de la formación del complejo coloreado es medida espectrofotométricamente.
Material utilizado:
-Rotulador de vidrio.
-4 tubos de ensayo.
-Micropipeta.
-Temporizador.
-Gradilla.
-Papel de filtro.
-Frasco lavador.
-Papel Parafilm.
-Pipeta Pasteur.
-Baño de agua.
-Puntas de micropipeta.
-Vaso de precipitado.
-Cubetas de espectrofotómetro.
- 2 pipetas graduadas de 1 ml.
-Espectrofotómetro.
Reactivos utilizados:
-Reactivo de Trabajo (RT) realizado con el Reactivo 1 (R1) y el Reactivo 2 (R2).
-Reactivo 3 (R3).
-Agua destilada.
-Patrón del hierro (Fe).
Muestras empleadas:
Se puede utilizar suero o plasma heparinizado. Nosotros utilizamos plasma heaparinizado.
Objetivos de la práctica:
-Saber cuál es el reactivo cromógeno de esta técnica.
-Decir por qué tenemos un tubo Blanco Reactivo de Trabajo (RT).
-Decir las muestras que no son válidas.
-Saber en qué unidades se mide la sideremia.
Desarrollo:
1. Lo primero que tenemos que hacer, es rotular los 4 tubos de ensayo como: Blanco RT , Patrón , Blanco muestra y Muestra.
2. En el tubo de ensayo rotulado como Blanco RT, añadimos con la pipeta graduada 1 ml de Reactivo de Trabajo (RT) , también con una pipeta Pasteur añadimos 1 gota de Reactivo 3 (R3) y por último, 200 microlitros de agua destilada con la micropipeta.
3. Después, en el tubo rotulado como Patrón, ponemos con ayuda de una pipeta graduada 1 ml de Reactivo de Trabajo (RT), también, con una pipeta Pasteur añadimos 1 gota de Reactivo 3 (R3) y por último, con una micropipeta añadimos 200 microlitros de Patrón.
4. A continuación, en el tubo rotulado como Blanco Muestra, añadimos con una pipeta graduada 1 ml de Reactivo de Trabajo (RT) y con una micropipeta deposito 200 microlitros de la sangre muestra.
5. Luego, en el tubo rotulado como Muestra, con una pipeta graduada añadimos 1 ml de Reactivo de Trabajo (RT) , también, 1 gota de Reactivo 3 (R3) y con una micropipeta ponemos 200 microlitros de la sangre muestra.
6. Después, tapamos cada tubo de ensayo con papel Parafilm y mezclamos.
7. Por último, incubamos en el baño de agua a 37ºC durante 5 minutos.
8. Tan solo queda calcular la absorbancia (A) del Patrón, del Blanco Muestra y de la Muestra con el espectrofotómetro.
Como mencionamos en la práctica anterior, para manejar el espectrofotómetro debemos seguir los pasos indicados en la hoja para su manejo.
Resultados obtenidos:
El Blanco RT, solo nos sirvió para calibrar el espectrofotómetro.
Los resultados fueron los siguientes:
- (A) Patrón: 0,105.
- (A) Blanco Muestra: 1,577.
- (A) Muestra: 1,581.
Lectura de resultados:
Los cálculos necesarios para obtener, a partir de las absorbancias obtenidas (A), la concentración de hierro en la muestra ( la sideremia) son los siguientes:
( ( (A) Muestra - (A) Blanco Muestra ) x 100 ) / (A) Patrón
*(A) = Absorbancia
*100= Concentración del Patrón = microgramos/ dl.
( ( 1,581 - 1,577 ) x 100 ) / 0,105 = 3,82 microgramos/ dl.
Interpretación clínica de los resultados:
Se establecen unos valores de referencia, son los siguientes:
-Hombres: 65-175 microgramos/dl.
-Mujeres: 40-150 microgramos/dl.
Al realizar los cálculos obtuvimos 3,82 microgramos/dl por lo que está muy por debajo de los valores normales.
Al ser un valor tan bajo podemos observar una hiposideremia, suele ocurrir en anemia ferropénica y en anemia de las afecciones crónicas, en este caso una anemia muy severa.
Resolución de los objetivos propuestos:
-El reactivo cromógeno de esta técnica es el patrón del hierro.
-Tenemos un tubo Blanco Reactivo de Trabajo (RT) para calibrar el espectrofotómetro.
-No son válidas las muestras lipérmicas (suero de la muestra con niveles altos de grasas o lípidos) o hemolizadas.
-La sideremia se mide en microgramos/dl.
Bibliografía:
-www.materialbiolog.blogspot.com
No hay comentarios:
Publicar un comentario