Información:
Los resultados de una determinación del tiempo de protrombina (TP) pueden expresarse en forma de porcentaje de actividad (Índice de Quick).
Para ello, se necesita preparar anteriormente una curva de actividad de la protrombina y después, interpolar en la gráfica trazada el valor en segundos del TP determinado en el plasma problema.
Fundamento de la práctica:
Para hacer la curva , necesitamos preparar una batería de diluciones, a partir de un plasma control normal, y se mide el TP del plasma control normal no diluido y de cada una de las diluciones preparadas.
Después de esto, se le asigna el 100% de actividad al número de segundos medidos en la determinación del TP del plasma control normal puro, y se calcula el porcentaje que, en proporción , les corresponde a los valores de TP determinados en cada unas de las diluciones de éste.
Con todos los datos, se traza una curva de calibrado (curva de actividad de la protrombina), apuntando, en el eje de ordenadas (el vertical), los valores, en segundos, del TP del plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones y, en el eje de abscisas (el horizontal), el % de actividad asignado a cada uno de ellos.
Material empleado:
-Tubos de ensayo de plástico.
-Prepipeta.
-Pipeta graduada de 2 ml.
-Rotulador de vidrio.
-Cubetas para coagulómetro.
-Micropipeta.
-Puntas de micropipeta.
-Coagulómetro.
-Trocitos de acero especiales para depositar en las cubetas.
-Papel de filtro.
-Gradilla.
-Regla.
-Papel milimetrado.
-Baño de agua.
-Frasco lavador.
Reactivos:
-Agua destilada.
-Solución salina al 0,85 %, nosotros utilizamos al 0,9 %.
-Tromboplastina cálcica (Debemos reconstruirla con 4 ml de agua destilada).
-Pool de plasmas normales o un plasma control normal (coagulation control). En este caso es mejor utilizar coagulation control porque tenemos una tabla de referencia con sus % de actividad.
A partir del pool de plasmas normales vamos a preparar una batería de diluciones:
Objetivos de la práctica:
-Decir con qué se diluye el pool de plasmas normales.
-Decir el porcentaje de actividad que se le asigna a la dilución del pool de plasmas de 1/2.
-Saber cuándo se pone en marcha la lectura del coagulómetro.
-Decir qué se anota en el eje de las ordenadas.
Procedimiento:
1. Rotular los tubos 1, 2, 3, 4 y 5.
2. Depositar la tromboplastina cálcica en un tubo de ensayo de plástico para que se atempere en el baño de agua a 37 ºC.
3. Rotular también las cubetas de coagulómetro.
4. Introducir un trocito de acero en una cubeta con % de actividad de 100 (Tubo 1) , el de otra con el de 50 (Tubo 2), el de otra con el de 33 (Tubo 3), el de otra con el de 25 (Tubo 3) y el de otra con el de 10 (Tubo 5).
5. Verter 100 microlitros de plasma puro ( % de actividad de 100) el que está rotulado como tubo 1 en la cubeta correspondiente y lo mismo hacemos con el resto de tubos.
6. Previamente hemos atemperado todos los tubos, desde el 1 hasta el 5. (Atemperar a 37 ºC).
7. Colocamos las 5 cubetas en la placa calefactora del coagulómetro.
8. Sucesivamente, vamos colocando cada una de las 5 cubetas en la celda de medida del coagulómetro.
9. Para ir introduciendo cada una de ellas, ponemos la cubeta en la zona donde hace la medición, le damos a "Reset" y después añadimos 200 microlitros de tromboplastina cálcica (a través del tapón rojo con ayuda de una micropipeta) cuando en la pantalla ponga 0.
Resultados obtenidos:
Tubo 1: plasma control no diluido (de 100 % de actividad) TP: 12,3 segundos.
Tubo 2: plasma control diluido a 1/2 (de 50 % de actividad) TP: 19,0 segundos.
Tubo 3: plasma control diluido a 1/3 (de 33 % de actividad) TP: 25, 9 segundos.
Tubo 4: plasma control diluido a 1/4 (de 25 % de actividad) TP: 32,4 segundos.
Tubo 5: plasma control diluido a 1/10 (de 10 % de actividad) TP: 69,7 segundos.
Lectura de resultados:
El TP es el tiempo que pasa desde que le hemos añadido la tromboplastina cálcica hasta la formación del coágulo de fibrina.
Para construir la curva de actividad de la protrombina hay que trazar una curva de calibrado o de referencia, en un papel milimetrado. Para ello se anotan, en el eje de ordenadas (eje vertical) , los valores, en segundos, de TP del pasma control no diluido y de cada una de sus diluciones , y , en el eje de abscisas (eje horizontal), el % de actividad asignado a cada uno de ellos.
Aquí tenemos una tabla de referencia para ayudarnos a realizar la gráfica:
Gráfica realizada a mano:
Gráfica realizada con Excel:
Resolución de los objetivos propuestos:
-El pool de plasmas normales o el plasma control normal se diluye con solución salina al 0,85 %, pero nosotros hemos utilizado solución salina al 0,9 %.
-A la dilución del plasma control de 1/2 se le asigna un porcentaje de actividad del 50 %.
-La lectura del coagulómetro se pone en marcha al agregar la tromboplastina cálcica.
-En el eje de ordenadas (eje y) se anota el % de actividad de la protrombina.
Bibliografía:
-Libro de Hematología.
No hay comentarios:
Publicar un comentario