Práctica: Determinación del valor hematocrito mediante el micrométodo.

Fecha: 21/11/2014.

Información sobre la práctica:


Cuando centrifugamos la sangre podemos diferenciar dos fracciones:


-Fracción forme: contiene hematíes (aprox. 45 %).
Se deposita en el fondo el tubo.
Un  pequeño porcentaje (aprox. 1%) son plaquetas y leucocitos.
Se sitúan entre el plasma y los hematíes formando una pequeña capa llamada buffy coat.


-Fracción líquida: es el plasma sanguíneo ( aprox. 55%).
Es el líquido sobrenadante.

El hematocrito ( HTO, HTC O HCT ) es la relación que existe entre el volumen ocupado por los hematíes y el ocupado por la sangre total, expresada en forma de porcentaje.


Este valor no es exactamente igual en todas las zonas vasculares del organismo.Así pues, el hematocrito obtenido con sangre capilar es algo superior al logrado a partir de sangre venosa.

Material necesario:

-Capilares heparinizados.

-Lector de microhematocrito.En nuestro laboratorio hay estos dos:

-Lanceta.
-Gasas.
-Plastilina.
-Centrífuga de microhematocrito.

-Regla milimetrada.



Reactivos

-Alcohol para desinfectar la zona de la que vamos a extraer la sangre.



Muestra:


Se puede utilizar sangre venosa o capilar. La venosa debe ser recogida en tubos con EDTA tripotásico.


Preferimos utilizar sangre capilar recogida con el capilar heparinizado (La primera gota de sangre fue desechada).


Debemos recordar que el HTO con sangre capilar sale más alto que con sangre venosa.


Objetivos de la práctica:


-Determinar el valor del hematocrito (HCT) mediante métodos manuales y métodos automáticos.


El HCT obtenido por métodos automáticos es más exacto porque en los  métodos manuales también se cuentan, junto con el volumen de hematíes, el de leucocitos, plaquetas y el del plasma que queda atrapado entre los hematíes.


Utilizaremos dos instrumentos:


*Regla milimétrica.


*Lector de microhematocrito.


-Saber el significado de la franja roja que tienen algunos capilares de microhematocrito.


-Saber la fuerza relativa de centrifugación (g) se centrifuga la sangre.


-Determinar cuál es el valor del hematocrito si lamedida de la columna de eritrocitos es es de 20 mm y la de la columna total es de 50 mm.


-Decir cómo debe ser la forma de actuar si con un capilar se obtiene un HTC de 45 y con el otro uno de 43.



Procedimiento de la práctica:


1.Tras haber desinfectado con alcohol, pinchado con una lanceta el tercer o cuarto dedo de una mano y desechar la primera gota de sangre, podemos llenar hasta las 3/4 partes de longitud de un capilar heparinizado.

2.Limpiar el exterior del capilar con una gasa.


3.Sellar el extremo del capilar por la parte por la que ha entrado la sangre con plastilina.Se realiza, penetrando el capilar en una bolita de plastilina y haciéndolo traspasar.


4.Colocar el capilar en la centrífuga de microhematocrito con la punta de la banda roja hacia dentro y la punta sellada con la plastilina, pegada a la pared de la centrífuga.


No hay que olvidar que hay que colocar de manera equilibrada los capilares, para ello, llenamos otro capilar con la misma cantidad de sangre que el anterior y los ponemos enfrentados.


5.Centrifugar los capilares a 12.000 g durante 5 minutos.


Calculo de los resultados:


Se puede hacer de dos maneras:


-Con un lector de microhematocrito:

UTILIZACIÓN DE UN LECTOR DE MICROHEMATOCRITO:


1.Situamos el capilar lleno 3 / 4 partes de su longitud en la ranura, con la columna de eritrocitos hacia el punto rojo.


2.Girar el disco central para hacer coincidir:


-La línea más alejada del punto rojo, con el final de la columna de plasma.
-La línea más cercana al punto rojo, con el inicio de la columna de eritrocitos.
-La línea central, con la interfase de separación presente entre el plasma y los eritrocitos.


3.Finalmente leemos en la escala inferior el valor del hematocrito.


A nosotros nos salió que el hematocrito es el 44% del total de la sangre.


-Con una regla milimetrada:

1.Hay que medir la distancia que existe desde que termina el tapón de plastilina hasta donde termina el plasma, a esa distancia la llamaremos "T".


2.Después hay que medir la distancia existente desde que termina el tapón de plastilina hasta donde termina la columna de eritrocitos, a esa distancia la vamos a llamar "E".


3.Finalmente calculamos el hematocrito mediante una regla de tres.


CÁLCULOS:


T= 5,5 cm = 55 mm.
E= 2,5 cm = 25 mm.


Si T_____100%     HTO= (E x 100) / T = (25 x 100) / 55 = 45,5%
E_______HTO



Haciéndolo con el lector de microhematocrito nos salió un HTO = 44% Y haciéndolo con la regla milimétrico nos salió un HTO =45,5%.


Estas dos pruebas se realizaron por duplicado (ambas) y los resultados salieron muy similares, como no tuvieron una diferencia superior al 2% no hizo falta volver a repetirlos.


Si la diferencia entre ambos capilares nos hubiese salido superior al 2%, habría que repetir la determinación .

En el caso de que la diferencia hubiese sido menor del 2% , hacemos la media de los dos valores, si el valor final del HTO es mayor del 50% se repite la determinación  alargando la centrifugación 5 minutos más (hasta10 minutos en total).



Interpretación clínica de los resultados obtenidos:


El valor normal del HTO está comprendido entre el 42 y el 47% en las mujeres, y entre el 45 y el 52% en los hombres.


Un valor bajo del HTO suele ser signo de una anemia y un valor alto del HTO suele ser signo del padecimiento de una poliglobulina.



Resolución de los objetivos propuestos:


-La franja roja que tienen los capilares de mocrohematocrito significa que llevan un anticoagulante llamado heparina.


-La sangre se centrifuga a 3.000 r.p.m.

-Si la medida de la columna de eritrocitos es de 20 mm y la de la columna total es de 50 mm , ¿ cuál es el valor del HTO ?


T= 50 mm.
E= 20 mm.

Si T _____100%        HTO = (E x 100) / T = (20 x 100) / 50 = 40%
E________HTO


- Si con un capilar se obtiene un HTO de 45% y con otro capilar se obiene un HTO de 43% , ¿cómo debe ser la forma de actuar ante estos resultados?


Hay una diferencia del 2% , por lo tanto, el resultado se da por válido.


Resultados obtenidos:


Como he mencionado anteriormente, hemos hecho ambas pruebas
 ( lector de microhematocrito y regla milimetrada ) por duplicado y como nos ha salido una diferencia del 2% se dan los resultados por válidos.


En el caso del lector, nos ha dado un valor del HTO del 44 % y con la regla milimetrada del 45,5 %.

Es más fiable el resultado que nos proporciona la regla milimetrada.


Valoración de los resultados:


El valor final de la determinación indica que el HTO es:


Normal.


Bibliografía:


-Libro de Hematología.

-www.brandsd.com

-www.cientificaschonfel.com