Práctica: Determinación del fenotipo y genotipo del sistema Rh.

Fecha: 07/05/2015.


Información sobre la práctica:


El genotipo es la dotación genética en el cromosoma y el fenotipo es la manifestación de ese genotipo.


En el caso de los sistemas de grupo sanguíneo el fenotipo se puede considerar como la suma total de antígenos detectados en elos hematíes mediante la utilización de antisueros específicos.


Algunas veces , el fenotipo es idéntico al genotipo. En el sistema Rh, esto solo ocurre en contadas ocasiones.


Debido a que no existe el antígeno d, ni el anticuerpo anti-d, es imposible determinar si el antígeno D es homozigoto o heterozigoto mediante su detección en los hematíes.Por esto, solo podemos determinar el genotipo  a base de estadística, es decir, para un fenotipo buscar el genotipo más probable.


La necesidad de determinar el genotipo se debe a que existen casos de madres inmunizadas frente a D, y conviene conocer si el padre es o no homozigoto para D, antes de producirse un segundo embarazo. Un padre que es homozigoto D transmitirá el gen D a todos sus hijos, mientras que uno heterozigoto lo transmitirá con un 50 % de ptrobabilidades.


Para determinar el fenotipo tenemos que enfrentar los hematíes problema con antisueros anti-D, anti-C, anti-E, anti-c y anti-e.

La c (minúscula) lleva una raya encima para diferenciarla de la C (mayúscula).

Fundamento:


Para investigar el genotipo del sitema Rh enfrentamos hematíes problema  a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh.


La existencia o no de esos antígenos en la superficie de los hematíes se detecta por reacción de aglutinación. Los resultados obtenidos se trasladan a una tabla donde se pueden ver los posibles genotipos que le corresponden.



Material necesario:


-Papel de filtro.

-Gradilla.

-Pipetas Pasteur.

-Tubos de hemólisis.

-Centrífuga.

-Rotulador de vidrio.

-Vaso de precipitado.

-Visualizador.

-Papel Parafilm.



Reactivos:


-Suero anti-D.

-Suero anti-E.

-Suero anti-C.

-Suero anti-e.

-Suero anti-c.

-Solución salina al 0,9 %.

Muestra:


-Suspensión de hematíes al 5 % lavados con suero fisiológico al 0,9% 3 veces.



Objetivos propuestos:


-Saber qué antisueros se utilizan en esta técnica.


-Decir por qué no existe suero anti-d.


-Saber qué expresan los cinco resultados obtenidos.


-Si la sangre es Rh +, decir si puede determinarse exactamente su genotipo con respecto al sistema Rh.


-Si los resultados obtenidos son : D-,C-, E+, c+ y e-, decir cuál es el genotipo posible de esta sangre.



Desarrollo de la práctica:


1º. Realizamos 3 lavados de hematíes y preparamos su suspensión al 5 % (Se realiza de la misma forma que en prácticas anteriores).


2º. Rotulamos 5 tubos de hemólisis con las letras: D, C, E c y e.


3º. En cada tubo tenemos que añadir 1 gota de antisuero correspondiente y 1 gota de suspensión de hematíes al 5 %. Mezclamos suavemente.

4º. Centrifugamos todos los tubos a 1.000 r.p.m durante 1 minuto (Realizamos otro tubo para compensar en la centrífuga).



Lectura de resultados:


Golpeamos suavemente con el dedo en la parte inferior del tubo y si hay aglutinación el resultado es positivo, si por el contrario, se produce una suspensión homogénea rojiza , hay ausencia de aglutinación, por lo que el resultado es negativo.


Interpretación clínica de los resultados:


Un resultado positivo indica la presencia de antígeno del sistema Rh buscado en ese tubo. El resultado negativo indica que no hay presencia.


Los 5 resultados obtenidos expresan el fenotipo de la sangre problema y se comparan con los resultados de la tabla de fenotipos y genotipos del sistema Rh.


Una vez que hemos encontrado la hilera coincidente, se mira en ella el posible o posibles genotipos que corresponden.


Esto es así porque si la sangre problema es Rh negativa (D-), se puede determinar su único genotipo posible con respecto al sistema Rh. Sin embargo, si la sangre es Rh positiva (D+), exsiten varios genotipos posibles que dan lugar al fenotipo anteriormente detectado.



Resultados obtenidos:


Siguiente la hilera que correspondía, obtuvimos los siguientes genotipos posibles: DcE/dca     DcE/Dce     Dce/dcE



Resolución de los objetivos propuestos:


-En esta técnica se utilizan los antisueros: anti-D, anti-E, anti-C, anti-e, anti-c.


-No existe suero anti-d porque no existe el antígeno d ni el anticuerpo anti-d.



-Los 5 resultados obtenidos expresan la existencia o no de esos antígenos. A partir de esos resultados podemos observar los genotipos posibles. 


-Si la sangre es Rh + el genotipo exacto con respecto al sistema Rh no se puede determinar porque hay varias opciones posibles.


- Si obtenemos los siguientes resultados: D-, C-, E+, c+ y e-, el genotipo posible de esta sangre es dcE/dcE.