Introducción:
En esta práctica vamos a realizar la determinación del grupo Rh pero en tubo.
Se realiza igual que en porta, pero en este caso utilizamos también suero fisiológico al 0,9 %.
Fundamento:
Al igual que con la técnica del porta, intentamos poner de manifiesto la presencia del antígeno D en la superficie de los hematíes mediante se enfrentamiento a un suero anti-D.
Material necesario:
-Papel de filtro.
-Tubos de centrífuga.
-Tubos de hemólisis.
-Gradilla.
-Papel Parafilm.
-Centrífuga.
-Baño de agua.
-Rotulador de vidrio.
-Vaso de precipitado.
-Visualizador.
-Pipetas Pasteur.
Reactivos:
-Suero anti-D.
-Albúmina bovina al 30 %.
-Solución salina fisiológica al 0,9 %.
Muestra:
Para obtener la muestra tenemos que lavar los hematíes 3 veces y realizar una suspensión al 5 %.
1º. En un tubo de centrífuga ponemos 1 ml de sangre con ayuda de una pipeta Pasteur y añadimos aproximadamente la misma cantidad de solución salina al 0,9 %, removemos y centrifugamos a 2.000 r.p.m durante 4 minutos.
2º. Después quitamos el sobrenadante con otra pipeta Pasteur y añadimos la misma cantidad de solución salina al 0,9 %, movemos suavemente y centrifugamos a las mismas revoluciones durante el mismo tiempo. Realizamos este proceso una última vez, en total se deben hacer 3 lavados de hematíes.
Ahora, para realizar la suspensión al 5 %, cogemos con otra pipeta Pasteur 5 gotas del fondo de los hematíes lavados y las depositamos en un tubo de centrífuga con 5 ml de solución salina al 0,9 %.
Por último, agitamos suavemente.
Objetivos de la práctica:
-Explicar por qué utilizamos el control de albúmina.
-Explicar qué ocurre si no aparece aglutinación el el tubo D.
-Decir qué debemos detectar mediante un Coombs indirecto.
-Decir cómo se prepara la muestra problema.
Procedimiento:
1º. Rotulamos 2 tubos de hemólisis con las letras D y A.
2º. En el tubo D añadimos 1 gota de suero anti-D y en el tubo A ponemos 1 gota de albúmina bovina al 30 %.
3º. A cada tubo le añadimos 1 gota de la suspensión de hematíes al 5 % que hemos realizado antes. Movemos suavemente.
4º. Centrifugar a 1.000 r.p.m durante 1 minutos o a 3.500 r.p.m durante 30 segundos.
Lectura de resultados:
Con el dedo damos pequeños golpes en la parte inferior del tubo, si se observan grumos rojos es aglutinación positiva, si por el contrario, golpeamos pero no se forman grumos sino una solución homogénea, no hay aglutinación o es una aglutinación negativa.
El tubo con albúmina es un control negativo, y debe dar siempre ausencia de aglutinación. En caso de no ser así, el resultado de la prueba no es válido.
Interpretación clínica de los resultados:
Si el tubo D presenta aglutinación y el tubo A no, la persona es Rh positivo.
Si no se produce aglutinación en ninguno, los incubamos a 37 ºC durante 30 minutos en el baños de agua. Después, centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 1 minuto y observamos si existe o no aglutinación.
Si persiste la negatividad, comprobamos que la persona no posee un Du (D débil) mediante una prueba de Coombs indirecta.
Si después de todo sigue sin aglutinar, la persona es Rh negativo.
Resultados obtenidos:
En un primer momento no obtuvimos aglutinación en ninguno de los tubos, los incubamos a 37º C en el baño de agua durante 30 minutos y centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 1 minuto.
Seguía sin producirse aglutinación pero como no podíamos realizar la prueba de Coombs indirecta, procedimos a indicar que el Rh de esta persona es negativo, debido a que sabíamos desde un principio que su Rh era negativo y por lo tanto, descartamos que tuviera Du (D débil).
Valoración de los resultados:
La sangre analizada es:
-Rh negativo.
Resolución de los objetivos propuestos:
-Utilizamos el control de albúmina como control negativo. Nunca debe dar presencia de aglutinación, en caso de no ser así, el resultado de la prueba no es válido.
-Si no aparece aglutinación en el tubo D, debemos incubar ambos tubos a 37 ºC en el baño de agua durante 30 minutos. Posteriormente centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 1 minutos y observamos si sigue sin aglutinar.
Si sigue pesistiendo la negatividad, tenemos que comprobar que la persona no posee un Du (D débil) mediante una prueba de Coombs indirecta.
Después de todo esto, si sigue sin aglutinar damos como resultado que la persona tiene un Rh negativo.
-Mediante un Coombs indirecto debemos detectar si la persona posee un Du (D débil).
-La muestra problema se prepara como he explicado en el apartado de muestra.
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