Fecha: 20/05/2015.
Información sobre la práctica:
En algunos casos, los anticuerpos tipo Ig G son incapaces de producir aglutinación de los hematíes por sí solos. Sin embargo, son capaces de adherirse a sus superficie y decirnos qu ehan sensibilizado a los hematíes. También son capaces de fijar el complemento, sin llegar a producir hemólisis de los hematíes.
Estos anticuerpos tipo Ig G pueden reaccionar con un suero de conejo en el que existen anticuerpos antiglobulina humana del tipo Ig M. El resultado de esta reacción es una aglutinación de los hematíes.
El suero antiglobulina humana es lo que llamamos suero de Coombs.
La prueba de Coombs puede realizarse de dos formas:
-Pruba directa: Buscamos anticuerpos del paciente enfrentando suero comercial (el de Coombs) con hematíes del paciente.
-Prueba indirecta: en este caso, enfrentamos los hematíes del paciente con suero Anti-D , después con Coombs y lavamos.
Fundamento:
El Du es un antígeno D débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación del Rh.
Por ello, debemos sensibilizar antes los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D, y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs. Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana, y en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.
En esta práctica vamos a realizar una prueba de Coombs indirecta.
Material necesario:
-Tubos de hemólisis.
-Centrífuga.
-Gradilla.
-Papel de filtro.
-Baño de agua.
-Reloj.
-Pipetas Pasteur de vidrio.
-Vaso de precipitado.
-Contenedor biológico.
-Visualizador.
Reactivos:
-Suero anti-D humano.
-Suero antiglobulina human de conejo (suero de Coombs).
-Suero salino fisiológico al 0,9 %.
Muestra:
-Hematíes de la sangre problema previamente lavados 3 veces en suero fisiológico y suspendidos al 5 % en dicha solución.
(El lavado de hematíes y la suspensión al 5 % lo hemos realizado en prácticas anteriores).
Objetivos propuestos:
-Decir el contenido del suero de Coombs.
-Saber qué se detecta con la prueba directa.
-Saber qué podemos detectar con la prueba indirecta.
-Decir qué buscamos en la sangre del paciente.
-Explicar qué ocurre si el control es positivo.
Desarrollo de la práctica:
1º. En un tubo de hemólisis colocamos una gota de suero anti-D y otra gota de suspensión de hematíes al 5 % con ayuda de 2 pipetas Pasteur de vidrio.
2º. Mezclamos con cuidado e incubamos en el baño de agua a 37 ºC durante 30-45 minutos.
3º. Después, lavamos los hematíes en solución salina tres veces consecutivas a 1.000 r.p.m durante 1 minuto (es a menos revolucines y menos tiempo porque ya están lavados de antes).
4º. Quitamos el sobrenadante con otra pipeta Pasteur de vidrio.
5º. Sobre el sedimento del tubo de hemólisis añadimos una gota de suero de Coombs con otra pipeta Pasteur de vidrio y mezclamos suavemente.
6º. Por último, centrifugamos el tubo a 1.000 r.p.m durante 1 minuto.
En las prácticas con centrífuga es muy importante recordar que siempre hay que enfrentar los tubos.
Lectura de resultados:
Golpeamos suavemente el fondo del tubo para ver la presencia o ausencia de aglutinación.
Interpretación clínica de los resultados:
Si hay aglutinación , el resultado es positivo. Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno Du, y se clasifica la sangre como Rh positivo variante Du.
En el caso de no existir aglutinación, se clasificará la sangre como Rh negativo.
Para evitar falsos positivos se realiza la prueba de Coombs directa con los hematíes problema. Esto nos sirve como control negativo.
Resultados obtenidos:
No hubo aglutinación, por lo tanto, la sangre es Rh negativo.
Resolución de los objetivos propuestos:
-El suero de Coombs contiene antiglobulina humana de conejo.
-En la prueba directa se detectan anticuerpos incompletos que han sensibilizado a los hematíes in vivo.
-En la prueba indirecta podemos detectar anticuerpos incompletos libres en el suero, o poner de manifiesto la presencia de antígenos débiles en la membrana de los hematíes.
-En la sangre del paciente buscamos la presencia del antígeno D débil.
-Si el control es positivo los resultados del análisis nos dan que la sangre problema es Rh positivo.
Bibliografía:
-www.wikipedia.org
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