Práctica: Determinación del tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA).

Fecha: 04/03/2015.


Introducción:

El tiempo de tromboplastina parcial activada (TPPA) es el tiempo que tarda en coagular un plasma pobre en plaquetas (PPP), tras su recalcificación y en presencia de un sustituto de f3p (factor 3 plaquetario).


El plasma pobre en plaquetas (PPP) se obtiene centrifugando sangre anticoagulada a 3.000 rpm durante 10 minutos.


Fundamento de la práctica:

Para recalcificar el plasma pobre en plaquetas (PPP)  se le añade solución de CaCl2 (Cloruro cálcico).


El sustituto del f3p (factor 3 plaquetario) consiste en una suspensión de fosfolípidos, obtenida a partir de cerebros de conejos, que se llama cefalina.


En esta prueba, también se añade con la cefalina una sustancia activadora de los factores de contactor. Como activadores de los factores de contacto se pueden utilizar varias sustancias, por ejemplo: caolín, polvo de vidrio, sílice, celite o ácido elágico.


Material necesario:

-Papel de filtro.

-Gradilla.

-Coagulómetro.

-Cubetas de coagulómetro.

-Trocitos de acero especiales para las cubetas.

-Micropipeta.

-Puntas de micropipeta.

-Rotulador de vidrio.

-Tubos de ensayo de plástico.

-Baño de agua.

Reactivos:

-Solución de cloruro cálcico a una concentración 0,025 M. (R2)

-Ácido elágico (R1).

-Coagulation control.

Muestra:

-Plasma pobre en plaquetas (PPP) que lo hemos obtenido centrifugando sangre anticoagulada a 3.000 rpm durante 10 minutos.


Objetivos de la práctica:

-Saber de dónde se obtienen el sustituto del f3p (factor 3 plaquetario).


-Saber cómo se llama el sustituto del f3p (factor 3 plaquetario).


-Decir qué activadores de los factores de contacto se pueden utilizar.


-Decir cuántos segundos debe superar el TTPA de la muestra al del control para ser considerado anormal.



Desarrollo de la práctica:

1. Rotulamos 4 tubos de plástico con las iniciales : M, R1 , C y R2.

2. Añadimos al tubo M: todo el plasma pobre en plaquetas que hemos obtenido anteriormente. Al tubo R1: 200 microlitros de cefalina activada (no hemos puesto la cantidad exacta que necesitamos para evitar que se evaporen los 100 microlitros que necesitamos), al tubo C le añadimos 100 microlitros de coagulation control. Por último, agregamos al tubo R2: 200 microlitros de solución de Cloruro Cálcio (CaCl2) (aunque en realidad vamos a necesitar 100 microlitros).



3. Atemperar los 4 tubos en el baño de agua menos de 5 minutos A 37 ºC para evitar que se evapore el plasma pobre en plaquetas (PPP).

En esta foto el baño está atemperándose hasta llegar a los 37ºC .

4. Tomamos 2 cubetas del coagulómetro y le añadimos 1 trocito de acero a la cubeta que vamos a llamar C y a la que vamos a llamar M. En la cubeta M ponemos 100 microlitros de la muestra y 100 microlitros de R1.



5. A la cubeta C le añadimos solo 100 microlitros de coagulation control y 100 microlitros de R1.

6. Ahora debemos utilizar el coagulómetro:


-Encendemos , pulsamos la flecha para poner 1 muestra y poner en PTT.


-Le damos a Reset y después , en el momento en el que sale en la pantalla 150 seg, pulsamos OK.


-Cuando en la pantalla ponga 20 seg, es el momento de la cubeta R1 en el lugar del tapón rojo y tapamos con éste.


-Esperamos y cuando este a 0 seg, con una micropipeta añadimos 100 microlitros de R2 a la cubeta M a través del tapón rojo, con mucho cuidado para evitar tocarlo, pues se parará el aparato.


-Lo mismo hacermos con la cubeta C y le añadimos también 100 microlitros de R2.



-Finalmente, nos salió un tiempo de 116,6 segundos.


Lectura de resultados:

El TTPA es el tiempo transcurrido desde la adición del Cloruro Cálcico (R2) hasta la formación del coágulo de fibrina.


Los valores normales se encuentran comprendidos entre los 30 y los 40 segundos. Un tiempo superior se considera alargado.


Interpretación clínica de los resultados obtenidos:

Obtuvimos un tiempo de 116,6 segundos, por lo que está alargado, se encuentra fuera de los valores normales.


El TTPA se utiliza, sobre todo, para detectar déficits de los factores de la vía intrínseca de la coagulación y para el control de los tratamientos con anticoagulantes y , en conreto, de las terapias con heparina.


Valoración de los resultados:

La muestra ensayada tiene un TTPA: 

Alargado.


Resolución de los objetivos propuestos:

-El sustituto del factor 3 plaquetario (f3p) se obtiene a partir de cerebros de conejos.



-El sustituto del factor 3 plaquetario (f3p) se llama cefalina.



-Como activadores de los factores de contacto se pueden utilizar sustancias como: caolín, polvo de vidrio, sílice, celite y ácido elágico.



-El TTPA de la muestra debe superar al del control más de 8 segundos para que se considere anormal.