Introducción de la práctica:
Para el recuento de plaquetas en una cámara de recuento de Neubauer, se diluye la muestra de sangre en un líquido de dilución y , posteriormente, se deposita en la cámara de recuento, donde se cuentan las plaquetas presentes en alguno de los cuadrados de uno de los retículos, por ejemplo, en el cuadrado grande.
Materiales utilizados:
-Papel de filtro.
-Puntas de micropipeta.
-Tubo de ensayo de plástico.
-Pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos o micropipeta.
-Gasas.
-Cámara de recuento de Neubauer.
-Tubo de goma con boquilla.
-Cubreobjetos.
-Placa Petri.
-Microscopio óptico.
-Frasco lavador.
-Tubo de ensayo.
-Gradilla.
Reactivos:
-Agua destilada.
-Líquido de dilución. Hay varios que pueden emplearse para el recuento de plaquetas, nosotros utilizamos este:
Muestra:
Sangre capilar o sangre venosa extraída recientemente y depositada en un tubo con EDTA.
Objetivos de la práctica:
-Decir el tipo de pipeta diluidora que se utiliza en el recuento de plaquetas.
-Decir las funciones que desempeña el líquido de dilución empleado.
-Saber cuánto líquido de dilución se necesita para efectuar un ensayo.
-Saber con qué se puede preparar una cámara húmeda.
-Especificar con qué objetivo se cuentan las plaquetas.
-Explicar cómo se aprecian los trombocitos o plaquetas en este recuento.
Desarrollo de la práctica:
1. Verter en un tubo de ensayo de plástico aproximadamente 1ml de líquido de dilución.
El volumen de líquido de dilución que sobre no se puede volver a introducir en el frasco, así evitamos contaminar el resto de líquido de dilución.
2. Con una pipeta de Thoma de glóbulos rojos, aspirar la muestra de sangre hasta la señal de 1.
3. Limpiar con una gasa la punta de la pipeta de Thoma.
4. Aspirar con el líquido de dilución hasta la señal de 101 de la pipeta de Thoma.
5. Agitar la pipeta suavemente de izquierda a derecha durante 5 minutos.
6. Desechar las 5 primeras gotas de la pipeta.
7. Cargar la cámara de recuento con la dilución de sangre de la pipeta (lo hemos realizado en la práctica anterior).
8. Colocar la cámara de recuento cargada en el interior de una cámara húmeda.
Se puede preparar una cámara de recuento húmeda con una placa Petri cerrada, en cuyo interior se deposita un papel de filtro humedecido con agua destilada del frasco lavador.
9. Dejar reposar durante 15 minutos.
10. Colocar la cámara de recuento sobre la platina del microcopio.
11. Enfocamos uno de los retículos de la cámara de recuento con el objetivo de 10 x , lo hacemos para observar la homogeneidad de la distribución de las células, de forma que, si ésta no es satisfactoria, se efectúa una nueva dilución de la muestra.
12. Enfocar uno de los cuadrados grandes, por ejemplo: el central, con el objetivo de 40 x.
Con un microscopio normal, las plaquetas se observan mejor situando el condensador ligeramente bajo.
13. Contar las plaquetas depositadas en ese cuadrado grande central.
Utilización de micropipeta en vez de pipeta de Thoma:
En el caso de que no haya pipetas de Thoma, se puede hacer también con micropipeta.
Se tiene que hacer una dilución 1/100 ( o 1/200, dependiendo de si llegas hasta la línea de 1 o hasta la línea de 0,5 ; como sucedía en el recuento de hematíes).
Se puede hacer con la cantidad que se quiera, por ejemplo: 0,5 ml o 500 microlitros:
0,5/100 = 0,005 ml = 5 microlitros de sangre.
0,5 - 0,005 = 0,495 ml = 495 microlitros de líquido de dilución.
Colocamos una punta de micropipeta y cogemos 5 microlitros de sangre , los depositamos en un tubo de ensayo.
Después, cogemos 495 microlitros de líquido de dilución y también los depositamos en el tubo de ensayo.
Por último, mezclamos.
Lectura de resultados:
Las plaquetas o trombocitos se observan como corpúsculos redondeados u ovalados, de tamaño muy pequeño y muy refringentes. Debemos evitar confundirlos con leucocitos, restos de glóbulos rojos o con partículas de polvo.
Para calcular el número de plaquetas por mm cúbico de sangre, se utiliza la siguiente fórmula:
PLT / mm cúbico = P x V x D = P x 1.000
PLT / mm cúbico = Número de plaquetas por mm cúbico de sangre.
P = Número de plaquetas contadas en 1 cuadrado grande.
V = Corrección de volumen (10).
D = Corrección de dilución (100).
Cálculos:
PLT / mm cúbico = 177 x 10 x 100 = 177 x 1.000 = 177.000 plaquetas / mm cúbico de sangre.
Resultados obtenidos:
-Número de plaquetas contadas en un cuadrado grande:
En un cuadrado grande contamos 177 plaquetas.
-Número de plaquetas por mm cúbico de sangre:
Como cada lado de cada cuadrado que forma el cuadrado grande mide 0,1 mm cúbicos y queremos saber el número de plaquetas por cada mm cúbico de sangre, necesitamos realizar la siguiente fórmula:
PLT / mm cúbico = P x V x D = P x 1.000
PLT / mm cúbico = 177 x 10 x 100 = 177 x 1.000 = 177.000 plaquetas / mm cúbico de sangre.
Valoración de los resultados:
Si la cifra de plaquetas que hemos obtenido es muy reducida , se efectúa una dilución menor de la muestra y se cuentan las plaquetas depositadas en carios cuadrados grandes.
En cambio, si la cifra de plaquetas que hemos obtenido es muy elevada, se efectúa una dilución mayor de la muesta.
El valor normal de plaquetas o trombocitos se encuentra comprendido entre 150.000 y 400.000 plaquetas por mm cúbico de sangre.
Teniendo en cuenta el dato anterior, podemos observar que hemos obtenido un valor normal de plaquetas ,ya que, la muestra presenta 177.000 plaquetas por mm cúbico de sangre y los valores normales se encuentran comprendidos entre 150.000 y 400.000 plaquetas por mm cúbico de sangre.
El número de plaquetas obtenido es:
-Normal.
Resolución de los objetivos propuestos:
-En el recuento de plaquetas se utiliza la pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos (en el caso de que no haya, podemos utilizar una micropipeta).
-El líquido de dilución empleado, rompe los eritrocitos, evita la agregación de las plaquetas entre sí , también evita su adhesión a otros elementos, y facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refringentes.
-Para efectuar un ensayo es necesario ,aproximadamente,1 ml de líquido de dilución.
-Una cámara húmeda se puede preparar con una placa Petri cerrada, en cuyo interior depositamos un papel de filtro humedecido con agua destilada.
-Las plaquetas se cuentan con el objetivo de 40 x.
-En este recuento las plaquetas o trombocitos se observan como corpúsculos redondeados u ovalados, de tamaño muy pequeño y muy refringentes.
Bibliografía:
- www.materialabor.blogspot.com
- www.umrherna.blogspot.com
- www.marienfeld-superior.blogspot.com
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