Fecha: 27/11/2014.
Introducción:
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros, es la fase anterior a ser un eritrocito. El reticulocito contiene en su interior restos de ARN (ribosomas), mitocondrias y otros órganos celulares.
Tienen un tamaño de 8-9 micrómetros de diámetro.Permanecen en la médula ósea (MO) unos 2 o 4 días y después salen a la sangre periférica, donde maduran un día.
La tinción de los reticulocitos es una tinción supravital porque se hace mientras las células están aún vivas.
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| Reticulocitos ( Imagen de Hematología artículos) |
Materiales utilizados:
-Gradilla.
-Lanceta.
-Gasas.
-Matraz aforado de 100 ml. -Probeta.
-Tubos de hemólisis.
-Pipetas Pasteur.
-Baño de agua.
-Vidrio de reloj.
-Portas.
-Filtro hecho con papel de filtro.
-Microscopio óptico.
-Frasco lavador.
-Capilar con EDTA.
-Balanza.
-Embudo.
-Parafilm.
Reactivos empleados:
-Alcohol o lejía para limpiar los portas.
-Azul de cresil brillante en polvo.
-Solución salina al 0,9%.
-Citrato sódico al 3%.
-Agua destilada.
-Aceite de inmersión.
Muestra:
Para esta práctica lo más aconsejable es utilizar sangre fresca anticoagulada con EDTA , para ello pinchamos con una lanceta la cara lateral del tercer o cuarto dedo de una mano (previamente desinfectado con alcohol y dejado secar para que se evapore), desechamos la primera gota de sangre y recogemos con el capilar con EDTA la sangre de la zona.
Objetivos:
-Conocer qué son los reticulocitos.
-Saber el tipo de tinción que estamos utilizando en la práctica.
-Saber por qué se realiza la corrección del porcentaje de reticulocitos.
-Conocer lo que expresa el IPR.
Desarrollo de la práctica:
1.Primero se debe preparar el colorante:
Mezclamos 80 ml de solución salina y 20 ml de citrato sódico al 3% ( lo hemos hecho al 3%: en un matraz aforado de 100 ml hemos puesto 3g de citrato sódico que se presenta en polvo y hemos enrasado con agua destilada proveniente del frasco lavador hasta la línea de enrase ).
Después pesamos 1g de azul de cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla anterior.
Luego, filtramos con un embudo y un filtro.
2.A continuación en un tubo de hemólisis echamos 3 gotas de la solución colorante y otras 3 gotas de sangre total previamente homogeneizada.Mezclamos suavemente y tapamos con parafilm.
3.Lo introducimos en el baño de agua a 37 ºC durante 5 minutos.
4.Después se vuelve a homogeneizar y se realiza una extensión con la disolución.
Las extensiones salieron muy cortas y no se extendían bien por el porta, por lo que decidimos disolver un poco más la solución
colorante.
Tras realizar varias extensiones, la que dimos por válida para observar al microscopio fue la número 3 porque en la número 1 la gota fue muy gruesa y la número 2 se nos quedó muy corta.
5.Observar al microscopio con el objetivo de 100 x con ayuda del aceite de inmersión.
Reticulocitos al microcopio óptico (labmedvet.blogspot.com).
Cálculo del porcentaje de reticulocitos:
Al observar al microscopio se deben contar 2.000 hematíes en total, para calcular el porcentaje de reticulocitos tenemos que emplear la siguiente fórmula:
% reticulocitos = ( Nº de reticulocitos contados / Nº de hematíes contados ) x 100
Para descartar errores se deben realizar dos extensiones y hacer el recuento a ambas, por lo que la diferencia entre ellas tiene que ser igual o menor a 5 reticulocitos.
% reticulocitos = ( 16 / 2.000 ) x 100 = 0,8 % de reticulocitos.
Interpretación clínica de los resultados obtenidos:
En adultos y niños los valores normales están entre 0,5 y 1,5% , nosotros hemos obtenido 0,8%, por lo que se encuentra entre los valores normales de reticulocitos.
La cantidad de reticulocitos expresada en tanto por ciento es un valor relativo que se refiere a una cifra normal de eritrocitos (en nuestro caso 2.000 ).Por ello, cuando existe una anemia con disminución en al cantidad de eritrocitos se compensa con un aumento de reticulocitos y debemos corregir su valor en tanto por ciento para poder considerarlo real.
La corrección se hace en base al hematocrito (HTO) del paciente, se calcula con la siguiente fórmula:
% de reticulocitos corregido = % reticulocitos x ( HTO del paciente / HTO normal )
Si la anemia es muy intensa, aparece en sangre periférica un número mayor de reticulocitos del que correspondería por regeneración eritoblástica. Esto se debe a que el estímulo eritropoyético que compensa va acompañado de un periodo de maduración intramedular más corto y una etapa de maduración en sangre periférica más larga.
Esto se conoce como "desviación reticulocitaria".Se debe hacer una segunda corrección del % de reticulocitos en función de los días que tarda en madurar el reticulocito en sangre periférica, y a esto se le llama índice de producción reticulocitaria (IPR).
Se utiliza la siguiente fórmula:
IRP = % reticulocitos corregido / días de maduración en sangre periférica
Esta tabla muestra los días que tarda en madurar el reticulocito:
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| (Libro de Hematología) |
Un IPR mayor de 3 nos indica un aumento de al actividad eritropoyética medular, mientras que un IPR menor de 2 indica una escasa actividad eritropoyética.
Resolución de los objetivos propuestos:
-Los reticulocitos son la fase anterior al eritrocito.Se origina por maduración del eritroblasto ortocromático.
Los reticulocitos no presentan núcleo, son algo mayores que los eritrocitos (8-9 micras )., su citoplasma todavía posee alguna cantidad de ARN y conserva cierta tonalidad azulada.Contiene algo de sustancia ribosómica y reticular que es visible mediante la tinción vital de azul cresil brillante.
Permanecen de 2 a 4 días en la médula ósea y 1 día en la sangre periférica hasta terminar de madurar y transformarse en eritrocito.
En condiciones normales, los eritrocitos constituyen del 0,5 al 1,5% del total de los eritrocitos circulantes.
-Estamos utilizando una tinción supravital de azul de cresil brillante.
-Hacemos la corrección del porcentaje de reticulocitos porque existe una anemia con disminución en la cantidad de eritrocitos que se compensa con un aumento en el número de reticulocitos y debemos corregir su valor en tanto por ciento para poder considerarlo real.
-El índice de producción reticulocitario (IPR) nos proporciona un valor numérico de la estimulación hematopoyética por encima de la actividad de la línea base normal.
Errores cometidos:
El error más significativo fue al realizar la solución colorante, debido a que, al no estar bien disuelto el frotis ,no se podía realizar correctamente la extensión.
Otro posible error pudo ser al contar el número de reticulocitos .Nosotros fuimos contando los reticulocitos de la muestra en forma de zig-zag y separando la muestra en secciones con reticulocitos guía, pero no es un contaje 100% fiable.
Propuestas de mejora:
Para el contaje de reticulocitos hubiese sido más preciso utilizar un autoanalizador.
-Los reticulocitos son la fase anterior al eritrocito.Se origina por maduración del eritroblasto ortocromático.
Los reticulocitos no presentan núcleo, son algo mayores que los eritrocitos (8-9 micras )., su citoplasma todavía posee alguna cantidad de ARN y conserva cierta tonalidad azulada.Contiene algo de sustancia ribosómica y reticular que es visible mediante la tinción vital de azul cresil brillante.
Permanecen de 2 a 4 días en la médula ósea y 1 día en la sangre periférica hasta terminar de madurar y transformarse en eritrocito.
En condiciones normales, los eritrocitos constituyen del 0,5 al 1,5% del total de los eritrocitos circulantes.
-Estamos utilizando una tinción supravital de azul de cresil brillante.
-Hacemos la corrección del porcentaje de reticulocitos porque existe una anemia con disminución en la cantidad de eritrocitos que se compensa con un aumento en el número de reticulocitos y debemos corregir su valor en tanto por ciento para poder considerarlo real.
-El índice de producción reticulocitario (IPR) nos proporciona un valor numérico de la estimulación hematopoyética por encima de la actividad de la línea base normal.
Errores cometidos:
El error más significativo fue al realizar la solución colorante, debido a que, al no estar bien disuelto el frotis ,no se podía realizar correctamente la extensión.
Otro posible error pudo ser al contar el número de reticulocitos .Nosotros fuimos contando los reticulocitos de la muestra en forma de zig-zag y separando la muestra en secciones con reticulocitos guía, pero no es un contaje 100% fiable.
Propuestas de mejora:
Para el contaje de reticulocitos hubiese sido más preciso utilizar un autoanalizador.
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