Práctica: Tinción de Giemsa.

Fecha: 11/11/2014

Información sobre la práctica:

La tinción de Giemsa es un método diferencial, quiere decir que es una tinción gracias a la cual podemos distinguir las distintas estructuras celulares, dependiendo de si éstas se tiñen con colorante ácido, con colorante básico o con la mezcla de los dos colorantes.

Las tinciones hematológicas tipo Romanowsky utilizan azul de metileno y productos de oxidación ( azur A, azur B y azur C ) como colorantes básicos, como colorante ácido utiliza la eosina.

Dependiendo de la proporción de azul de metileno y de eosina que contenga el colorante ,existen distintos métodos de tinción, por ejemplo:

-Giemsa ( el que vamos a realizar en esta práctica ).
-Leishman.

-Wright ( Lo veremos en la práctica siguiente ).

-Panóptico de Pappenheim ( Lo veremos más adelante ).

Materiales necesarios:

-Papel de filtro.
-Guantes desechables y bata ( En las prácticas de tinciones y de sangre son muy importantes ).
-Cristalizador.
-Puente de tinción.
-Pipeta Pasteur de vidrio.
-Frasco lavador con agua destilada.
-Portas.
-Tubos de ensayo.
-Microscopio óptico.
-Cubres.
-Gradilla.

Reactivos usados para esta práctica:

-Colorante Giemsa.
-Solución tampón pH 7,2.
-Metanol.
-Aceite de inmersión ( para observar al microscopio con el objetivo de 100 x ).

Muestra específica:

Sangre capilar os sangre venosa anticoagulada. ( El anticoagulante  debe ser o heparina o EDTA ).

Objetivos:

-Utilizar como colorante la mezcla de azul de metileno ( colorante básico ) y de eosina ( colorante ácido ).

-Decir los anticoagulantes más adecuados para esta técnica y con qué reactivo fijamos la extensión sanguínea.

-Mencionar el tiempo que debe actuar el colorante en la extensión.

Procedimiento:

1.Realizamos una extensión sanguínea como lo hemos hecho en prácticas anteriores y la colocamos sobre el puente de tinción, que está encima del cristalizador.

2.Cubrimos la extensión con metanol con la ayuda de una pipeta Pasteur y  dejamos que haga efecto durante 3 minutos, a continuación lo escurrimos y lo dejamos secar.
 ( El objetivo es  que la extensión se fije ).

3.Ahora tenemos que hacer una una disolución que consiste en 0,2 ml de azur-eosina-azul de metileno según Giemsa y 2ml de solución tampón pH 7,2 ( La disolución se debe realizar en un tubo de ensayo ).

4.Mezclamos las dos sustancias en el tubo de ensayo con ayuda de una pipeta Pasteur y cubrimos la extensión con la dilución de colorante, dejándolo reposar durante aproximadamente 25 minutos.

En la foto no se observa bien, pero la dilución entre el azur-eosina-azul de metileno y la solución tampón pH 7,2 es de un color azul más claro que cuando en la práctica anterior hemos utilizado Giemsa al 3% en agua destilada.

5.Escurrimos el exceso y lavamos con agua destilada. Después ,lavamos con solución tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos de colorante.

6.Dejamos secar en posición vertical.

7.Por último observamos al microscopio óptico con el objetivo de 100 x utilizando el aceite de inmersión.

Interpretación de los resultados:

-En esta técnica los anticoagulantes más adecuados son la heparina o el EDTA.

-Para fijar la extensión sanguínea hemos utilizado metanol.

-El colorante en el frotis debe actuar durante 25 minutos aproximadamente.

Al observar al microscopio vimos que los eritrocitos se tiñen de color rosa asalmonado y las plaquetas se ven muy pequeñas y de color violeta.

En ocasiones también se pueden observar neutrófilos, eosinóflos, basófilos, monocitos y linfocitos. Pero solo pudimos observar los hematíes y las plaquetas.