Práctica: Preparación de gota gruesa.

Fecha: 10/11/2014

Información sobre la práctica:

El paludismo ( o malaria ) es producido por parásitos del género Plasmodium.

Hay cuatro especies de parásitos palúdicos:

-Plasmodium vivax.

-Plasmodium ovale.

-Plasmodium malariae.

-Plasmodium falciparum.

Este es el ciclo de transmisión de la malaria:

El parásito se encuentra en el primer vector que es el mosquito.Ese mosquito pica a un humano, el humano pasa a ser hospedador inicial.Si el humano es mujer y está embarazada puede transmitir el parásito al feto a través de la placenta.La mujer al tener al parásito en su interior se produce una infección del hígado, esta infección pasa a ser una infección sanguínea hasta que un segundo mosquito pica a la mujer.
El segundo mosquito es el segundo vector, pica a otro humano y así sucesivamente.

Materiales necesarios:

-Papel de filtro.
-Una pipeta Pasteur de vidrio preferiblemente.
-2 portas.
-Tubo capilar heparinizado ,si la muestra es sangre capilar, o no heparinizado , si la muestra es sangre venosa anticoagulada.
-Guantes desechables.
-Cristalizador.
-Recipiente para contener la pipeta y el capilar para evitar manchar la superficie de trabajo.
-Puente de tinción.
-Frasco lavador.
-Gradilla.
-Tubo de ensayo.
-Microscopio óptico.

Reactivos:

-Metanol.
-Agua destilada.
-Disolución de colorante Giemsa al 3% en agua  destilada.

Muestra:

Sangre capilar o venosa anticoagulada con heparina o EDTA ( anticoagulantes ).

Objetivos de esta práctica:

-Aprender a realizar la preparación de gota gruesa para detectar el parásito que provoca el paludismo o malaria.

-Decir qué colorante se utiliza para teñir la preparación de gota gruesa y cómo están los eritrocitos en la preparación de gota gruesa.

-Por último, decir con qué sustancia se fija la preparación de gota gruesa.

Desarrollo de esta práctica:

Para el estudio rutinario de muestras de sangre que puedan contener parásitos palúdicos, se hace una preparación en forma de extensión fina y otra de gota gruesa , las dos en el mismo porta.

La extensión fina: para observar a los eritrocitos infectados y a los parásitos que hay dentro de ellos ( en el caso de que la persona esté infectada ).

La gota gruesa: para observar el aspecto de los parásitos que puedan encontrarse, ya que los eritrocitos están lisados y los parásitos palúdicos suelen ser más abundantes y compactos que en la extensión fina.

Extensión fina y gota gruesa

Técnica:

1. Poner una gota de sangre en el centro del porta de soporte y realizar la extensión.

2. A la derecha de la extensión ,aproximadamente a 1cm, colocar tres gotas pequeñas de sangre. 
( Las tres gotas deben ocupar los vértices de un pequeño e imaginario triángulo equilátero cuya base está dirigida hacia la gota pequeña ).

3. Con una esquina del porta extensor , unir con movimientos circulares las 3 gotas de sangre que forman el triángulo ,hasta formar una capa gruesa y uniforme.( Se remueven para lograr la desfibrinación de la sangre )

4. Dejar secar la preparación con el porta en posición horizontal.

5. Fijar solamente la extensión fina, para ello hay que depositar 3 gotas de metanol sobre ella y dejar que actúe unos segundos.

6. La gota gruesa se deja secar durante 24 horas.

7. Cuando han pasado las 24 horas , ponemos el porta con la muestra en un puente de tinción encima de un cristalizador.

8. Con ayuda de una pipeta Pasteur, añadimos al porta que contiene la muesta , Giemsa al 3% y lo dejamos actuar durante 30-45 minutos.

9. Verter agua destilada del frasco lavador hasta que ya no salga más colorante al lavar.

10. Por último , dejar secar la preparación en posición vertical.

Lectura de resultados:

En nuestro caso la persona no presentaba paludismo.
En el caso de que la persona estuviese infectada , en la extensión fina, encontraríamos parásitos palúdicos, tanto en el interior de los eritrocitos como fuera de ellos.Por ejemplo:

-Puntos de Schüffner y de Maurer:

-Formas en anillo ( esquizontes anulares ):

-Formas ameboideas ( esquizontes ameboides ):

-Conglomerados de merozoitos ( esquizontes maduros ):

-Gametocitos libres en el plasma:

Resultados e interpretación:

-Al observar en el microscopio nuestra muestra no hemos detectado ninguna pista de que estuviese infestada, por lo tanto, el individuo no está infestado por plasmodium.

-El colorante que se utiliza para teñir la preparación de gota gruesa es Giemsa al 3%.

-Los hematíes en la preparación de gota gruesa se observan lisados y apelmazados y no se han teñido del todo bien, debido a que no dejamos que el colorante Giemsa al 3% actuase de 30-45 min.

-De la preparación de gota gruesa solo se fija la extensión fina con metanol.


Bibliografía:

-www.ferriz.com.mx

-www.euroclinix.es

-www.bioloparasitologia.com

-www.esmateria.com