Práctica: Prueba cruzada mayor.

Fecha: 22/05/2015.


Introducción:


El objetivo de las pruebas pre-transfusionales es detectar las posibles reacciones antígeno-anticuerpo entre la sangre del donante y la del receptor, antes de la transfusión.


Para ello, es imprescindible realizar las siguientes determinaciones: 


-Tipaje correcto del grupo ABO y Rh del donante y del recptor: siempre se intentará transfundir sangre del mismo grupo del receptor, y si no es posible, se usará una sangre compatible.

-Escrutinio de los anticuerpos irregulares en el receptor: Si se detectan anticuerpos irregulares, deberán ser identificados para administrar sangre que carezca de los antígenos correspondientes. No es imprescindible realizar esta determinación en la sangre del donante, ya que el volumen de plasma transfundido es pequeño en comparación con el plasma del receptor, pero sí es conveniente hacerla para evitar riesgos.


-Prueba cruzada mayor: Trata de determinar la incompatibilidad entre las sangres enfrentando el suero del receptor con los hematíes del donante. (Es la que vamos a realizar).


Otras pruebas que también pueden realizarse son:


-La prueba cruzada menor: se enfenta el suero del donante con los hematíes del receptor. Solo se hace cuando se transfunde una gran cantidad de plasma, ya que en este caso, la presencia de anticuerpos en la sangre del donante puede ser peligrosa. La utilización de concentrados de hematíes hace innecesaria la realización de esta prueba.


-Un autocontrol: donde se buscan autoanticuerpos mediante el enfrentamiento entre el suero del receptor y sus propios hematíes.


Todas estas pruebas se hacen en medio salino y en medio albuminoso, para detectar todos los anticuerpos presentes.

Fundamento de la práctica:


Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante, primero en medio salino, después , en medio albuminoso, y por último frente al suero antiglobulina de Coombs. Con el último paso, detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.


Es importante respetar los tiempos de incubación, así, evitaremos posibles errores.



Materiales:


-Papel de filtro.

-Tubos de hemólisis.

-Centrífuga.

-Baño de agua.

-Pipetas Pasteur de vidrio.

-Gradilla.

-Vaso de precipitado.

-Reloj.

-Papel Parafilm.

-Visualizador.

Reactivos:


-Solución salina fisiológica al 0,9 %.

-Albúmina bovina al 30 %.

-Suero antiglobulina de Coombs.

Muestras:


-Suero del receptor, por ejemplo: del grupo B + y hematíes lavados tres veces con solución salina y resuspendidos en ella al 5 % del grupo A2 + (del donante).

Plasma del grupo B + ( receptor).

Hematíes lavados 3 veces y resuspendidos
al 5 % del grupo  A2+ (donante).

Objetivos propuestos:


-Decir qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor.


-Sabe cuándo se debe realizar la prueba cruzada menor.


-Explicar por qué debemos realizar la prueba en medio salino y albuminoideo.


-Decir qué pone de manifiesto  el suero antiglobulina de Coombs.




Desarrollo de la práctica:


1º. En un tubo de hemólisis añadimos 1 gota de suspensión de hematíes del donante al 5% (grupo A2+) y 2 gotas del suero del receptor (grupo B +).


2º. Mezclamos suavemente y dejamos a temperatura ambiente durante 2-3 minutos. (Hemos realizado 2 para enfrentar en la centrífuga).

3º. Centrifugamos a 2.500 r.p.m durante 1 minuto.


4º. Leemos el resultado obtenido en medio salino.

Lectura de resultados:


Se realiza resuspendiendo el botón hemático con suavidad después de cada una de las centrifugaciones.




Interpretación clínica de los resultados:


La ausencia de aglutinación en todos los pasos indica que las sangre son compatibles, y por tanto, la transfusión es posible.


La aglutinación en cualquiera de las fases de la prueba indica incompatibilidad.



Resultados obtenidos:


A nosotros nos aglutinó en la primera fase: en medio salino.


En el caso de que no nos hubiese aglutinado a la primera hay que hace lo siguiente:


1º. Añadir al tubo, 3 gotas de albúmina bovina al 30 %.


2º. Mezclar e incubar en el baño de agua durante 30 minutos a 37 ºC.


2º. Centrifugamos a 2.500 r.p.m durante 1 minuto.


3º. Leemos el resultado obtenido en medio albuminoso.


Si nos sigue sin salir el botón hemático, continuamos con el último paso.


4º. Lavamos 3 veces los hematíes con solución salina al 0,9 % oara eliminar los anticuerpos que no se han fijado a los eritrocitos. Retiramos el sobrenadante del último lavado.


5º. Añadimos una gota de suero antiglobulina humana de Coombs al tubo. Mezclamos y centrifugamos a 1.000 r.p.m durante 2 minutos.


6º. Leemos los resultados obtenidos con el suero de Coombs.


Si sigue sin haber presencia de botón hemático,  la sangre se puede transfundir.



Valoración de los resultados:


Las sangres analizadas son:

-Incompatibles.



Resolución de los objetivos propuestos:


- En la prueba cruzada mayor se enfrenta suero del receptor con hematíes del donante.


-La prueba cruzada menor se debe realizar solo cuando se transfunde una gran cantidad de plasma, ya que en este caso,la presencia de anticuerpos en la sangre del donante puede ser peligrosa.


-La prueba se debe realizar en medio salino y albuminoideo porque queremos saber si se produce aglutinación en alguno de los tres medios para descartar la transfusión si se produce aglutinación en alguno de ellos.


-El suero antiglobulina de Coombs pone de manifiesto anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.




Bibliografía:


-es.slideshare.net