Fundamento de la práctica:
Este es otro método para determinar el grupo sanguíneo.
Los hematíes problema contienen las sustancias antigénicas del sistema ABO y se enfrentan a sueron conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos.
El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes que han reaccionado.
Materiales:
-Tubos de hemólisis o de centrífuga.
-Rotulador de vidrio.
-Pipetas Pasteur de plástico o de vidrio.
-Centrífuga.
-Pipeta graduada de vidrio de 5 ml.
-Papel de filtro.
-Prepipeta.
-Luz para observar mejor la presencia o no de aglutinación.
-Vaso de precipitado.
-Gradillas.
Reactivos:
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| Suero anti-A |
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| Suero anti-B |
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| Suero anti-AB |
-Solución de suero salino.
Muestra:
-Sangre anticoagulada con EDTA.
Objetivos de la práctica:
-Decir el tipo de técnica inmunológica que se emplea en este análisis.
-Decir la concentración a la que se prepara la suspensión de hematíes problema.
-Saber cómo se ve una aglutinación positiva.
-Saber a qué se debe el fenómeno de Rouleaux.
-Explicar cómo se pueden evitar los falsos positivos.
Desarrollo de la práctica:
1º. Primero realizamos un lavado de hematíes, para ello, rotulamos un tubo de centrífuga y añadimos 1 ml de muestra de sangre y 2,5 ml de solución salina,después agitamos suavemente evitando producir hemólisis (realizamos 3 lavados).
2º . Centrifugamos 4 minutos a 2.000 r.p.m y quitamos el sobrenadante con ayuda de una pipeta Pasteur.
3º . Con otra pipeta cogemos 2 gotas de los hematíes del fondo del tubo y las depositamos en otro tubo.
4º . Después le añadimos 5 ml de solución salina con ayuda de una pipeta graduada de 5 ml. Removemos y ya está la solución de hematíes al 2 %.
5º . Rotulamos 3 tubos de hemólisis: A,B y AB.
6º. A cada tubo le añadimos 1 gota de la solución de hematíes al 2 %. También añadimos 2 gotas de suero anti-A en el tubo A, 2 gotas de suero anti-B en el tubo B y 2 gotas de suero anti-AB en el tubo AB.
7º . Centrifugamos los tubos enfrentándolos en la centrífuga durante 1 min a 1.000 r.p.m o 30 segundos a 3.400 r.p.m (como nos sobraba 1, hemos realizado otro tubo A para compensar).
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| En el tubo A podemos apreciar aglutinación. |
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| En el tubo B no podemos apreciar aglutinación. |
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| En el tubo AB podemos observar aglutinación. |
Lectura de resultados:
Después de centrifugar, golpeamos suavemente el fondo de cada tubo par adesprender el sedimento y observar si hay presencia o ausencia de aglutinación.
En nuestro caso, se produjo aglutinación en el tubo A y el AB, por lo tanto, la muestra es del grupo sanguíneo A ( el tubo AB solo se realiza para comprobar).
Interpretación clínica de los resultados obtenidos:
Se realiza igual que la técnica del porta.
Pueden dar falsos negativos y también falsos positivos.
Los falsos negativos pueden deberse a: restos de detergente o sustancias extrañas en los tubos.
Los falsos positivos pueden deberse a: aglutinaicón no específica o al fenómeno de Rouleaux.
Resultados obtenidos:
La muestra de sangre es del grupo:
-A
Resolución de los objetivos propuestos:
-En este análisis se emplea la técnica en tubo.
-La suspensión de hamtíes problema se prepara entre el 2 y el 4 %.
-La aglutinación positiva es cuando se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.
-El fenómeno de Rouleaux se debe a sustancias como: el fibrinógeno, las gammaglobulinas, el dextrano y la polivinilpirrolidona.
-Los falsos positivos se pueden evitar lavando previamente los hematíes problema.
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