Práctica: Determinación funcional de fibrinógeno.

Fecha: 9/03/2015.


Información sobre la práctica:

El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina.

El tiempo de formación del coágulo de fibrina es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente en la muestra de plasma.


La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inverasamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

Materiales:

-Papel milimetrado.

-Gradilla.

-Papel de filtro.

-Baño de agua.

Para atemperar tiene que estar a 37 ºC.

-Tubos de ensayo de plástico.

-Frasco lavador.

-Pipeta Pasteur de plástico.

-Micropipeta.

-Puntas de micropipeta.

-Cubetas de coagulómetro.

-Rotulador de vidrio.

-Coagulómetro.

-Trocitos de acero para depositar en el interior de las cubetas.

Reactivos:

-Trombina bovina (R1).

-Tampón Imidazol (R2).

-Solución Caolín (R3).

-Plasma calibrador o de referencia (coagulation control).

-Agua destilada.



Muestra:

Plasma pobre en plaquetas (PPP) preparado con sangre anticoagulada centrifugada a 3.000 rpm durante 10 minutos.


Objetivos propuestos

-Decir de qué tipo es la determinación de fibrinógeno realizada en esta práctica.


-Decir a qué concentración está la trombina bovina.


-Saber a qué dilución se somete a la muestra.


-Saber cuál es la fibrinogenemia normal.


Procedimiento:

1. Debemos preparar la muestra diluida, para ello, en un tubo de plástico añadimos 50 microlitros de la muestra (PPP) Y 450 microlitros del R2. A esta muestra diluida la llamaremos (MD).


2. Después, hay que preparar las diluciones del R2 que se muestran en la siguiente tabla:

3.Atemperamos las diluciones, la MD y el R3.


4. De cada dilución añadimos 200 microlitros en 5 cubetas de coagulómetro rotuladas y con su correspondiente trocito de acero especial para estas cubetas.


5. A caba cubeta añadimos 20 microlitros de R3 y atemperamos en el baño a 37 ºC.



6. De la muestra del principio (MD)  también añadimos 200 microlitros en una cubeta para coagulómetro con su trocito de acero y además 20 microlitros de R3 y atemperamos en el baño al igual que los otros tubos.


7. En el coagulómetro vamos introduciendo sucesivamente las 5 diluciones (1,2,3,4 y 5) y la muestra diluida (MD) en la zona de lectura.

8. Pulsamos "Reset" y cuando esté en la pantalla a 0, añadimos 100 microlitros de R1 (Es muy importante que recordemos que la Trombina bovina (R1) no se atempera).

9. Una vez añadido el R1 está empezando a contar el tiempo que tarda en coagular.

Resultados obtenidos:

Tubo 1: 11,7 segundos.

Tubo 2: 15,6 segundos.

Tubo 3: - (lo descartamos porque salían unos valores no proporcionales)

Tubo 4: -

Tubo 5: 46,9 segundos.

MD: 42,3 segundos.

Gráfica a mano:

Gráfica con Excel:

Lectura de resultados:

La muestra diluida (MD) tardó en coagular 42,3 segundos, por lo que al observar en la gráfica, vemos que corresponde aproximadamente a una concentración de 55,4 mg/dl.

Según el protocolo los valores normales de concentración se encuentran entre 200 y 400 mg/dl.


Nosotros hemos obtenido una concentración de fibrinógeno mucho más baja de lo normal.


Significado clínico:

El fibrinógeno (Factor I), proteína sintetizada en el hígado (la mayoría), es un componente de la sangre utilizado para formar el coágulo de fibrina, ya que, el fibrinógeno se activa por acción de la trombina y da lugar a la fibrina (de lo que está hecho el coágulo).


La determinación del fibrinógeno nos ayuda a evaluar alteraciones de los mecanismos de la coagulación.


La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y en embarazo; por el contrario se observan valores bajos en terapias trombolíticas, enfermedades hepáticas, disfibrinogenia congénita, DIC (Coagulación intravascular diseminada) y pancreatitis.


Resolución de los objetivos propuestos:

-La determinación de fibinógeno realizada en esta práctica es cronométrica.


-La trombina bovina (R1) está a una concentración de 100 U NIH/ml.


-La muestra se somete a una dilución 1/10.


-La fibrinogenemia normal se encuentra entre 200 y 400 mg/dl.