Introducción:
Las pruebas de mezclas se realizan cuando alguno de los tiempos determinados en el plasma problema (normalmente, el TTPA) está alargado.
Se mezclan a partes iguales el plasma problema y un plasma que se sabe que es normal.Tras lo cual, se incuba la mezcla a 37 ºC en el baño de agua durante unos 15 minutos aproximadamente.
Si los tiempos determinados en la mezcla se corrigen, falta algún factor en el plasma problema y su carencia ha sido compensada con el aporte suplementario de factores de la cía intrínseca contenidos en el plasma normal.
Fundamento:
La prueba de mezcla con plasma normal se hace cuando en el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado. En estos casos se supone que el paciente sufre un déficit de algún factor de la vía intrínseca y, en concreto, de los factores VIII, XI o XII.
Para llevarla a cabo, mezclamos a partes iguales el PPP (plasma pobre en plaquetas) problema con PPP normal, y se repite la determinación de la TTPA (tiempo de tromboplastina parcial activada), pero no en el PPP problema, sino en la mezcla de los dos plasmas.
La mezcla de los dos plasmas se incuba en el baño de agua a 37ºC durante aproximadamente 15 minutos (deberíamos dejar incubar 60 minutos).
Si el TTPA se corrige, en el plasma problema falta alguno de los factores de la vía intrínseca que, sin embargo, si está presente en el PPP normal o pool de plasmas normal.
Si el TTPA no se corrige, el trastorno coagulatorio se debe a otros motivos, por ejemplo, a la actuación de sustancias inhibidoras de la coagulación.
Material:
-Papel de filtro.
-Cubetas de coagulómetro.
-Gradilla.
-Trocitos de acero especiales para cubetas de coagulómetro.
-Coagulómetro.
-Tubos de ensayo de plástico.
-Baño de agua.
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| Para atemperar a 37 ºC. |
-Micropipeta.
-Puntas de micropipeta.
-Rotulador.
Reactivos:
-Solución de Cloruro cálcico (CaCl2) 0,025 M.
-Ácido elágico que hace el mismo efecto que la cefalina activada.
-Pool de plasmas normales.
-Plasma pobre en plaquetas (PPP) anómalo.
Muestras:
El plasma pobre en plaquetas (PPP) anómalo y el pool de plasmas normal.
Objetivos de la práctica:
-Decir cuándo debe hacerse una prueba de mezcla con plasma normal.
-Saber qué se debe investigar si tras la mezcla con plasma normal, no se corrige el TTPA (tiempo de tromboplastina parcial activada).
Desarrollo:
1. A partir del PPP anómalo hay que hacer una dilución 1/2 con el pool de plasmas normal.
2. En tubo de ensayo de plástico añadimos 55 microlitros de PPP anómalo y otros 55 microlitros de pool de plasmas normal (deben estar en la misma proporción porque es dilución 1/2 y necesitamos añadir 5 microlitros más de cada uno porque se evapora algo de cantidad al encubar a 37 ºC en el baño de agua).
3. Atemperamos también la solución de Cloruro cálcico (CaCl2) y el ácido elágico.
4. En una cubeta de coagulómetro introducimos un trocito de acero especial.
5. Rotulamos el extremo superior de la cubeta para identificarla.
6. Vertemos 100 microlitros de la dilución en la cubeta y le añadimos 100 microlitros de ácido elágico.
7. Ponemos la cubeta en el coagulómetro (en la placa calefactora para que se atempere un poco durante unos minutos).
8. Después, ponemos la cubeta en la celda de medida y presionamos "Reset", cuando esté a 0 a través del tapón rojo y con una micropipeta agregamos 100 microlitros de Cloruro cálcico (CaCl2) 0,025 M.
9. Al agregarle el Cloruro cálcico (CaCl2) comienza la coagulación.
Lectura de resultados:
El tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA) es el tiempo transcurrido desde que le hemos añadido el CaCl2 hasta que se ha formado el coágulo de fibrina.
Los valores normales de la TTPA están comprendidos entre 30 y 40 segundos.Un tiempo superior a estos valores se considera alargado.
Obtuvimos un valor alargado (80,5 segundos).
Interpretación clínica de los resultados:
Si el TP es normal y el TTPA está alargado, el enfermo, probablemente, padecerá un trastorno de la vía intrínseca.
Se debe repetir la determinación del TTPA ,pero incubando la mezcla de plasma y ácido elágico durante 15 minutos. Si con este cambio se corrige el alargamiento del TTPA, es decir , se torna normal, probablemente, hay un déficit de PK (precalicreína).
Si aumentamos el tiempo de incubación y no se corrige el TTPA, tiene que hacerse una prueba de mezcla con plasma normal.
Si tras la mezcla con plasma normal, el TTPA se corrige, es decir, deja de estar alargado, falta algún factor de la vía intrínseca (Factor VIII, IX, XI O XII) en la muestra y su carencia ha sido compensada con el aporte suplementario de factores contenidos en el plasma normal.
Por el contrario, no se corrige el TTPA, se debe investigar la presencia en el plasma de un inhibidor de la coagulación (heparina, EDTA,etc).
Resultados obtenidos:
Tras la mezcla del plasma problema anómalo con plasma normal:
No se ha corregido el TTPA.
Valoración de los resultados:
La prueba realizada indica:
La presencia de un inhibidor de la coagulación en el plasma anómalo.
Otro modo de hacer la práctica:
Esta práctica se puede hacer también sin coagulómetro, para ello, hacemos todos los mismos pasos, pero esta vez utilizaremos un baño de agua.
Obtuvimos un tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA) de 65 segundos, mucho más aproximado a los valores normales del TTPA.
Resolución de los objetivos propuestos:
-Debe hacerse una prueba de mezcla con plasma normal cuando en el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado.
-Si no se corrige el TTPA tras la mezcla del plasma, se debe investigar la presencia en el plasma de un inhibidor de la coagulación (heparina, PDF, inhibidor tipo lupues, etc.).
