Fecha: 12/01/2015.
Introducción:
El recuento de leucocitos (WBC) consiste en determinar el número de leucocitos o glóbulos blancos presentes en un volumen de sangre determinado.
Material necesario:
El material es el mismo que en recuento de eritrocitos, pero la pipeta diluidora de Thoma tiene que ser para glóbulos blancos.
-Papel de filtro.
-Cámara de recuento de Neubauer mejorado.
-Pipeta diluidora de Thoma, para glóbulos blancos o también se puede realizar con una micropipeta.
-Tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora de Thoma para glóbulos bláncos.
-Un cubreobjetos.
-Un microscopio óptico.
-Frasco lavador.
-Gasas.
-Prepipeta.
-Micropipeta.
-Tubos de ensayo.
-Gradilla.
-Puntas de micropipeta.
-Vaso de precipitado.
Reactivos empleados:
-Líquido de dilución: el más utilizado es el de Turck (Ya se encuentra preparado en nuestro laboratorio).
Se compone de:
- 2 ml de ácido acético glacial (produce la lisis de los eritrocitos sin alterar a los leucocitos).
- 1 ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1 % (tiñe el núcleo de los leucocitos. El violeta de genciana puede ser sustituido por azul de metileno).
- 100 ml de agua destilada.
Muestra:
Sangre capilar fresca o sangre venosa anticoagulada con EDTA.
Utilización de la micropipeta en lugar de la pipeta de Thoma:
Siempre la proporción va a ser 1/10 para leucocitos en el caso de que lleguemos a la señal de 1 y para la señal de 0,5 la proporción será 1/20. (Normalmente la proporción es 1/10)
Por ejemplo, queremos una dilución de 1ml:
1ml = 1.000 microlitros.
1.000/10 = 100 microlitros de sangre.
1.000 microlitros totales - 100 microlitros de sangre = 900 microlitros de líquido diluyente.
Lo único que tenemos que hacer es coger con la micropipeta 100 microlitros de la muestra de sangre y depositarla en un tubo de ensayo.
Después, con otra punta de micropipeta cogemos 900 microlitros de líquido diluyente (en este caso Turck) y lo depositamos también el tubo de ensayo.
Por último, mezclamos.
Objetivos de la práctica:
-Saber cuál es el líquido de dilución utilizado en el recuento de leucocitos (WBC).
-Decir para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución.
-Especificar el objetivo con el que se pueden contar los leucocitos.
-Si la sangre se diluye a 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en 2 cuadrados grandes periféricos, ¿cuál es el recuento de leucocitos (WBC) obtenido?
Procedimiento:
1. Poner sobre el retículo de la cámara de Neubauer un cubreobjetos, para ello, lo humedecemos previamente con un poco de agua del frasco lavador y lo colocamos primero por uno de los extremos, para evitar la formación de burbujas de aire.
2. Aspirar la sangre con la pipeta de Thoma conectada el tubo de goma y éste a su vez conectado a la prepipeta.
3. Debemos llegar hasta la señal de 1 y limpiar con cuidado la punta de la pipeta de Thoma con una gasa.
4. A continuación, aspirar el líquido diluyente hasta la señal de 101.
5. Desenganchar el tubo de goma de la pipeta de Thoma y homogeneizar el contenido del bulbo, para ello, sujetar la pipeta por los extremos con los dedos pulgar e índice y agitar suavemente.
6. Desechar las 3 primeras gotas. Éstas corresponden al líquido presente en el tubo capilar largo de la pipeta de Thoma, que no está mezclado con la sangre.
7. Depositar la siguiente gota entra la cámara de recuento de Neubauer y el cubre. Esto se realiza poniéndola en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejándola que penetre por capilaridad.
8. Dejar reposar la sangre y observar al microscopio con el objetivo de 10 x primero y con el objetivo de 40 x después.
9. Por último hay que contar los leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes de las esquinas del retículo.
Para ahorrarnos tiempo también se pueden contar 2 y multiplicar x2 el resultado.
-Saber cuál es el líquido de dilución utilizado en el recuento de leucocitos (WBC).
-Decir para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución.
-Especificar el objetivo con el que se pueden contar los leucocitos.
-Si la sangre se diluye a 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en 2 cuadrados grandes periféricos, ¿cuál es el recuento de leucocitos (WBC) obtenido?
Procedimiento:
1. Poner sobre el retículo de la cámara de Neubauer un cubreobjetos, para ello, lo humedecemos previamente con un poco de agua del frasco lavador y lo colocamos primero por uno de los extremos, para evitar la formación de burbujas de aire.
2. Aspirar la sangre con la pipeta de Thoma conectada el tubo de goma y éste a su vez conectado a la prepipeta.
3. Debemos llegar hasta la señal de 1 y limpiar con cuidado la punta de la pipeta de Thoma con una gasa.
4. A continuación, aspirar el líquido diluyente hasta la señal de 101.
5. Desenganchar el tubo de goma de la pipeta de Thoma y homogeneizar el contenido del bulbo, para ello, sujetar la pipeta por los extremos con los dedos pulgar e índice y agitar suavemente.
6. Desechar las 3 primeras gotas. Éstas corresponden al líquido presente en el tubo capilar largo de la pipeta de Thoma, que no está mezclado con la sangre.
7. Depositar la siguiente gota entra la cámara de recuento de Neubauer y el cubre. Esto se realiza poniéndola en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejándola que penetre por capilaridad.
8. Dejar reposar la sangre y observar al microscopio con el objetivo de 10 x primero y con el objetivo de 40 x después.
9. Por último hay que contar los leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes de las esquinas del retículo.
Para ahorrarnos tiempo también se pueden contar 2 y multiplicar x2 el resultado.
Cálculo de resultados:
Se cuentan los leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes periféricos y hay que dividir entre 4 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el número de leucocitos que hay en un cuadrado grande.
La longitud de cada uno de los lados de los cuadrados grandes es de 1 mm , y la longitud del espacio comprendido entre éstos y el cubre es de 0,1 mm; hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar el número de leucocitos en 1 mm cúbico y no en 0,1 mm cúbicos.
Como la sangre antes del recuento se diluye, hay que multiplicar el resultado por 10, si hemos enrasado la pipeta de Thoma hasta 1, o por 20, si se ha enrasado hasta 0,5.
Debemos emplear la siguiente fórmula:
WBC = L / 4 x 10 x D
WBC = Recuento de leucocitos por mm cúbico de sangre.
L = Número de leucocitos contados en 4 cuadros grandes.
D = Factor de dilución.
WBC = 420 / 4 x 10 x 10 = 10.500 leucocitos / mm cúbico de sangre.
Resultados obtenidos:
-Leucocitos contados en los 4 cuadrados grandes periféricos:
En total en los 4 cuadros grandes periféricos hay 420 leucocitos.
-Factor de dilución:
Es 10 , porque la sangre la hemos enrasado hasta 1 en la pipeta de Thoma.
-WBC:
El recuento de leucocitos (WBC) es de 10.500 leucocitos/ mm cúbico de sangre.
Interpretación de los resultados:
Se considera normal un recuento de leucocitos (WBC) comprendido entre 5.000 y 11.000 leucocitos / mm cúbico de sangre.
Por debajo del valor normal se considera leucopenia y por encima del valor normal se considera leucocitosis.
Valoración de los resultados:
El recuento de leucocitos (WBC) obtenido es:
-Normal.
Resolución de los objetivos propuestos:
-El líquido de dilución utilizado en el recuento de leucocitos (WBC) es el de Turck.
-El violeta de genciana que contiene el líquido de dilución sirve para teñir el núcleo de los leucocitos, para que éstos puedan observarse mejor.
-Los leucocitos se pueden contar con el objetivo de 10 x.
-Si la sangre se diluye a 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en 2 cuadrados grandes periféricos, ¿cuál es el recuento de leucocitos (WBC) obtenido?
WBC = 100/2 x 10 x 10 = 5.000 leucocitos / mm cúbico de sangre.
Se considera un valor normal.
Bibliografía:
- www.materialeslabo.blogspot.com
- www.biologhthem.blogspot.com
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